Уролог на дом, уролог круглосуточно, вызов уролога, вызов уролога на дом с УЗИ, выезд уролога на дом, срочная урологическая помощь, УЗИ круглосуточно, уролог, уролог-андролог, консультация уролога, андролог, лечение простатита, хронический простатит, лечение уретрита, лечение ЗППП, повышение потенции, увеличение эрекции, эректильная дисфункция, преждевременное семяизвержение, термотерапия
Оперативно. Доступно. Анонимно.

Вызов уролога на дом в Москве. Уролог на дом круглосуточно с УЗИ. Уролог круглосуточно. ЭКСТРЕННАЯ УРОЛОГИЧЕСКАЯ ПОМОЩЬ, ВЫЗОВ УРОЛОГА НА ДОМ С УЗИ В МОСКВЕ И МОСКОВСКОЙ ОБЛАСТИ 
Вызов уролога на дом круглосуточно в Москве и Подмосковье 8 (495) 125-28-26, (499) 502-80-70 (многоканальный) НА ЗВОНОК ОТВЕТИТ ВРАЧ-УРОЛОГ! ЗВОНИТЕ СЕЙЧАС!

На главную      Напишите нам
  Доктора     Заболевания     Анализы и диагностика     Новости     Статьи     Контакты     Вопрос-ответ   
Урология статьи

ПЦР (полимеразная цепная реакция) в урологии

Инфекции мочевыводящих путей считаются наиболее распространен-ными бактериальными инфекциями. Выделяют поражение мочевого пузыря (цистит), почек (пиелонефрит) и мочеиспускательного канала (уретрит). Инфекции мочевыводящих путей встречаются у женщин значительно чаще, чем у мужчин – каждая третья женщина к 24 годам получала антимикробную терапию по поводу таких инфекций. Выделяют группы, имеющие повышенный риск развития инфекций мочевыводящих путей: дети, беременные женщины, пожилые, пациенты с повреждением спинного мозга и/или установленным мочевым катетером, больные диабетом, рассеянным склерозом, ВИЧ-инфицированные, лица с аномальным развитием мочевы-водящих путей. К биологическим факторам, увеличивающим восприимчивость к инфекциям мочевыводящих путей, относятся аномалии развития, наличие обструкции мочевыводящих путей, наличие инфекции в анамнезе, дефицита эстрогена.

Среди возбудителей неосложненных бактериальных инфекций мочевыводящих путей преобладают уропатогенные штаммы Escherichia coli (вызывают 75-95% обычных и более 30% госпитальных поражений). Спектр возбудителей осложненных инфекций гораздо шире: наиболее часто выявляются Chlamydia trachomatis и Neisseria gonorrhoeae, однако у многих пациентов с симптоматическими нехламидийными и негонококковыми уретритами этиологическим агентом может являться Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis, Ureaplasma urealyticum.

Лабораторные методы диагностики для установления этиологического диагноза хламидийной инфекции имеют приоритетное значение в связи с широким спектром вызываемой хламидиями патологии, непатогномонич-ностью клинической симптоматики и развитием осложнений. Только лабораторная диагностика способна обеспечить проведение эффективных лечебных и профилактических мероприятий для борьбы с этой инфекцией.

Применяемые в настоящее время методы лабораторной диагностики микроорганизмов обладают различной степенью чувствительности, специфичности и информативности. Среди используемых методов выделяют морфологические, бактериологические, иммунологические, молекулярно-биологические.

Достоинством культурального метода является его высокая специфичность (до 100%). Чувствительность метода зависит от условий забора, хранения и транспортировки материала, а также подбора антибиотиков для транспортной среды с целью удаления сопутствующей бактериальной флоры. Объективная чувствительность метода составляет 80%. Диагностическая эффективность культурального метода во многом определяется опытом и квалификацией исполнителей, а также обеспечением необходимых условий работы (дорогостоящее оборудование, контролируемые условия для работы с культурой клеток). При использовании культурального метода диагностики результаты анализа становятся известны лишь через 5-14 дней.

Преимуществами иммунологического метода являются быстрота проведения анализа при высокой точности, непосредственное определение возбудителя в объекте исследования, возможность оценить неспецифическое свечение. К недостаткам метода относят необходимость флюоресцентной микроскопии, субъективную интерпретацию, невысокую производитель-ность.

Микроскопический метод диагностики обладает очень низкой чувствительностью, кроме того, он довольно субъективен и требует высокой квалификации специалиста.

Для успешного лечения инфекционных заболеваний необходимо как можно раньше обнаружить возбудитель и назначить специфическую антимикробную терапию. Многие возбудители инфекций мочевыводящих путей локализуются внутриклеточно, и поэтому склонны к образованию персистирующих форм. Так, например, M. genitalium часто вызывает персистирующие или рецидивирующие инфекции, которые плохо поддаются стандартной терапии. Особенностью протекания таких заболеваний является отсутствие четкой клинической картины, слабо выраженный иммунный ответ организма хозяина. Кроме того, некоторые микроорганизмы плохо растут в культуре либо не культивируются вообще, а также обладают высокой антигенной изменчивостью. Все это в ряде случаев делает традиционные методы диагностики возбудителей инфекционных заболеваний в урологии (микроскопические, бактериологические, иммуно-логические) малоэффективными. Например, при определении Chlamydia trachomatis в урологической практике чувствительность иммуноферментного анализа составила только 40%.

Для достижения оптимальной чувствительности, необходимой в клинической лабораторной диагностике, было предложено копировать участок ДНК-мишени инфекционного агента. Это стало возможным после того, как американский ученый K. Mullis в 1985 году изобрел метод полимеразной цепной реакции (ПЦР). Данный метод оказался лишен многих недостатков, перечисленных выше, и быстро завоевал популярность.

В основе метода полимеразной цепной реакции () лежит комплементар-ное достраивание участка геномной ДНК возбудителя, осуществляемое in vitrо с помощью фермента термостабильной ДНК-полимеразы (например, Taq-полимеразы). Этот фермент содержится в бактериях Thermus aquatiqus и Thermus thermophilus, и способен работать при температуре 95-97°C. Для применения метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) необходимо заранее знать, по крайней мере, частичную последовательность ДНК – мишени, чтобы использовать ее для синтеза олигонуклеотидных праймеров. Смесь, состоящая из ДНК-мишени, ДНК-полимеразы, праймеров и нуклеотидов используется в реакции амплификации - многократно повторяющихся циклах нагревания и охлаждения для синтеза специфической области ДНК-мишени. Каждый цикл полимеразной цепной реакции (ПЦР) включает в себя денатурацию ДНК при температуре 95°C, отжиг праймеров (температура индивидуальна для каждой пары праймеров, обычно 54-64°С), и элонгацию при 72°C (оптимальная температура для работы Taq-полимеразы). Смена температурных режимов осуществляется автоматически в программируемом термостате – амплификаторе. Удвоение числа копий амплифицируемого участка в каждом цикле полимеразной цепной реакции (ПЦР) позволяет за 30-40 циклов наработать фрагмент ДНК, ограниченный парой специфических праймеров, в количестве, достаточном для его детекции. Чаще всего для анализа результатов полимеразной цепной реакции (ПЦР) используется электро-форез в агарозном или полиакриламидном геле с окраской ДНК бромистым этидием. Теоретически, с помощью метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) можно наработать миллионы копий всего из одной молекулы ДНК-мишени менее чем за час.

Преимущества метода полимеразной цепной реакции (ПЦР): высокая чувствительность и специфичность, так как в исследуемом материале выявляется уникальный, характерный только для данного возбудителя фрагмент ДНК; быстрота получения результата (через 4-5 часов при традиционной реакции, и менее чем 1 час при использовании полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени); возможность одновременной диагностики нескольких возбудителей в одной биологической пробе. К недостаткам метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) относятся: получение в ряде случаев как ложно-положительных, так и ложно-отрицательных результатов в результате загрязнения биологического материала; избыточная чувствительность метода, превышающая клиническую значимость; невозможность отличия живых возбудителей от мертвых; наличие специально оборудованной лаборатории; дорогие приборы и реактивы.

Для успешного проведения анализа важно правильно собрать материал у пациента и правильно провести пробоподготовку. Требования к забору образцов биологического материала для лабораторных исследований методом полимеразной цепной реакции (ПЦР), по сравнению с бактериальными методами, значительно упрощены. Если соскоб взят универсальным зондом, рабочая часть зонда, содержащая исследуемый материал, отрезается и помещается в одноразовую пробирку типа «Эппендорф» с консервирующим раствором. Если забор производится ложкой Фолькмана, рабочая часть инструмента споласкивается в консервирующем растворе, содержащемся в одноразовой пробирке типа «Эппендорф». Максимальный срок хранения материала составляет 1 сутки в холодильнике при температуре +4°С - +8°С. Лаборатория, в которой осуществляется диагностика возбудителей методом полимеразной цепной реакции (ПЦР), должна быть разделена на «чистую» и «грязную» зоны. Необходимо, как минимум, три отдельных комнаты, снабженных предбоксниками. В одной комнате производят выделение ДНК из биологического материала, в другой – раскапывание ПЦР-смеси, и в третьей – детекцию продуктов реакции методом электрофореза.

К настоящему времени предложены всевозможные модификации полимеразной цепной реакции (ПЦР), разработаны новые амплифика-ционные технологии. Так, для одновременного определения нескольких последова-тельностей-мишеней была предложена мультиплексная полимеразная цепная реакция (ПЦР), когда в реакционную смесь добавляется несколько различных праймеров. Так, для диагностики микроорганизмов – возбудителей негонококковых уретритов и других урогенитальных инфекций, была разработана тест-система для одновременной амплификации участка 16S рРНК M. genitalium, M. hominis, U. urealyticum и U. parvum с последующей гибридизацией с четырьмя специфическими зондами.

С целью увеличения чувствительности и специфичности метода, была разработана так называемая «гнездовая» полимеразная цепная реакция («nested» PCR), при которой вторая пара праймеров садится на участок ДНК-мишени, ограниченный первой парой праймеров. Для диагностики РНК-содержащих вирусов с успехом применяется RT-PCR. Этот метод основан на превращении молекулы РНК в комплементарную ДНК с помощью фермента обратной транскриптазы, и последующей амплификации соответствующей к-ДНК.

Наиболее известной модификацией метода является количественная полимеразная цепная реакция в режиме реального времени (Real-Time PCR), при которой амплификация и детекция продуктов реакции осуществляется в одной пробирке. Одним из возможных подходов к мониторингу продуктов реакции является использование флуоресцентных красителей, таких как SYBR-Green I, которые неспецифически связываются с двухцепочечной ДНК. Наиболее распространенным подходом является использование флуоресцентно-меченого ДНК-зонда, который специфически садится на внутреннюю область амплифицируемого фрагмента. Флуоресцентная метка также может быть ковалентно присоединена и к самим праймерам, что обеспечивает флуоресценцию, прямо пропорциональную количеству ПЦР-продукта - репортерную флуоресценцию. В настоящее время метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени с успехом применяется в урологии для определения ДНК микробных тел в образцах мочи, мазках из уретры, в том числе и количественного. Так, при определении Chlamydia trachomatis чувствительность метода достигала 95,7%, специфичность 100%.

Источник www.rusmg.ru

Назад к списку

 

 


КРУГЛОСУТОЧНАЯ ЭКСТРЕННАЯ УРОЛОГИЧЕСКАЯ ПОМОЩЬ, ВЫЗОВ УРОЛОГА НА ДОМ С УЗИ
Гарантируется полная анонимность
Вызов уролога круглосуточно 8(495) 125-28-26 (499) 502-80-70
(многоканальный)

490-349-934

* Решение урологических и андрологических проблем любой сложности! Звоните сейчас!
* Возможно предоставление лекарств на курс!
* Контроль и гарантии качества терапии!
* При вызове уролога на дом с указанием сайта анализ мочи бесплатно!
Сайт уролога-андролога, г. Москва врач уролог

Почему Вы делаете вызов уролога на дом, обратившись к нам?

Как вызвать уролога на дом? Уролог в Москве

Эксклюзивная услуга вызова уролога на дом. Возможности уролога на дому. 
Что такое обследование уролога?

Осмотр врача-уролога
Вы на приеме у уролога
Вызов уролога в Москве

Уролог круглосуточно или урология для VIP 
Что дает консультация уролога?

Онлайн консультации урологом круглосуточно
Уролог онлайн
Уролог-андролог. Кто это?
Что такое андрологические анализы?
Кому и зачем нужна консультация андролога?
Как повысить потенцию?
Увеличение потенции. Решения вопроса
Как добиться улучшения потенции?
Лечение импотенции
Как лечить простатит?
Лечение хронического простатита
Вылечить цистит
Лечение хронического цистита
Что такое эректильная дисфункция?
Лечение эректильной дисфункции
Лечим уретрит в кратчайшие сроки
Сдаем анализы урологические
Анализы и диагностика. Их ценность в урологии
Для чего нужны анализы на ЗППП?
Диагностика ЗППП
Лечим ЗППП
Заболевания с половым путём передачи. Что это?
Диагностируем хламидиоз
Лечим хламидиоз
Лечение микоплазмы
Лечение трихомониаза
Лечение гонореи
Лечение генитального герпеса
Молочница, ее проявления и лечение мужчин
Лечим молочницу
УЗИ-диагностика в урологии и андрологии
ПЦР-диагностика в урологии и андрологии
Лечение мужского бесплодия, пути и решения

Внимание!!! Новая услуга - консультация опытного семейного врача. Диагностика. Звоните. 

     



 

Анализы и диагностика  ::  Простатит  ::  Нарушения потенции (эректильная дисфункция)  ::  Аденома простаты  ::  Уретрит  ::  Цистит  ::  Хламидиоз  ::  Микоплазмоз  ::  Уреаплазмоз  ::  Гарднереллез  ::  Гоноррея  ::  Трихомониаз  ::  Вирус папилломы человека  ::  Генитальный герпес  ::  Профилактика ЗППП  :: 
Rambler's Top100